無菌室應(yīng)根據(jù)既經(jīng)濟(jì)又科學(xué)的原則來設(shè)置。其基本要求有以下幾點：
1.無菌室應(yīng)有內(nèi)、外兩間，內(nèi)間是無菌室，外間是緩沖室。房間容積不宜過大，以便于空氣滅菌。內(nèi)間面積2×2.5＝5m2，外間面積1×2＝2m2，高以2.5m以下為宜，都應(yīng)有天花板。
2.內(nèi)間應(yīng)當(dāng)設(shè)拉門，以減少空氣的波動，門應(yīng)設(shè)在離工作臺更遠(yuǎn)的位置上；外間的門也用拉門，要設(shè)在距內(nèi)間更遠(yuǎn)的位置上。
3.在分隔內(nèi)間與外間的墻壁或“隔扇”上，應(yīng)開一個小窗，作接種過程中必要的內(nèi)外傳遞物品的通道，以減少人員進(jìn)出內(nèi)間的次數(shù)，降低污染程度。小窗寬60cm、高40cm、厚30cm，內(nèi)外都掛對拉的窗扇。
4.無菌室容積小而嚴(yán)密，使用一段時間后，室內(nèi)溫度很高，故應(yīng)設(shè)置通氣窗。通氣窗應(yīng)設(shè)在內(nèi)室進(jìn)門處的頂棚上（即離工作臺更遠(yuǎn)的位置），為雙層結(jié)構(gòu)，外層為百葉窗，內(nèi)層可用抽板式窗扇。通氣窗可在內(nèi)室使用后、滅菌前開啟，以流通空氣。有條件可安裝恒溫恒濕機(jī)。
無菌室工作規(guī)程
1.無菌室滅菌。每次使用前開啟紫外線燈照射30min以上，或在使用前30min，對內(nèi)外室用5%石炭酸噴霧。
2.用肥皂洗手后，把所需器材搬入外室；在外室換上已滅菌的工作服、工作帽和工作鞋，戴好口罩，然后用2%煤酚皂液將手浸洗2分鐘。
3.將各種需用物品搬進(jìn)內(nèi)室清點、就位，用5%石炭酸在工作臺面上方和操作員站位空間噴霧，返回外室，5～10min后再進(jìn)內(nèi)室工作。
4.接種操作前，用70%酒精棉球擦手；進(jìn)行無菌操作時，動作要輕緩，盡量減少空氣波動和地面揚塵。
5.工作中應(yīng)注意安全。如遇棉塞著火，用手緊握或用濕布包裹熄滅，切勿用嘴吹，以免擴(kuò)大燃燒；如遇有菌培養(yǎng)物灑落或打碎有菌容器時，應(yīng)用浸潤5%石炭酸的抹布包裹后，并用浸潤5%石炭酸的抹布擦拭臺面或地面，用酒精棉球擦手后再繼續(xù)操作。
6.工作結(jié)束，立即將臺面收拾干凈，將不應(yīng)在無菌室存放的物品和廢棄物全部拿出無菌室后，對無菌室用5%石炭酸噴霧，或開紫外線燈照射30min。